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你知道使用膠原檢測試劑盒的操作步驟嗎

點擊次數:136發布時間:2022-01-14
 
  膠原檢測試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被人I型膠原蛋白(COL-1)抗體透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中人I型膠原蛋白(COL-1)濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本中人I型膠原蛋白(COL-1)含量。
 
  膠原檢測試劑盒的操作步驟:
 
  1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。
 
  2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
 
  3、加標準品和待測樣本:取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);標準品和待測樣本孔均再加酶標工作液50μL;空白對照孔不加。
 
  4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 
  5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
 
  6、顯色:每孔先加入顯色劑A液50μL,再加入顯色劑B液50μL,37℃避光顯色15min。
 
  7、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。
 
  8、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
 
  9、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。最終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
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